揭秘纳米抗体制备第一阶段：羊驼免疫全流程

在纳米抗体的发现过程中，对羊驼进行免疫是至关重要的一步。以下是标准的羊驼免疫流程：

1.抗原制备与优化

根据实验需求选择适当的抗原（蛋白、肽、多糖等），确保高纯度、高稳定性。可选择结合适当的佐剂，以增强免疫反应。抗原与佐剂需要等体积充分混合，制成稳定乳剂后用于羊驼免疫。康体生命采用涡旋振荡的方式制备抗原乳剂。

抗原的乳化程度直接影响免疫效果，因此乳化后必须进行质量检查。抗原与弗氏佐剂乳化后性状形成油包水，康体生命抗原乳剂检查的方法是：室温下将制成的乳剂滴一滴在自来水表面，质量合格的乳剂滴入水面后应保持乳滴珠完整不分散。

2.免疫方案设计

设定免疫剂量和免疫周期（通常4-6次，每次间隔7-14天），优化免疫策略以产生高亲和力的纳米抗体。具体免疫周期可参考下表

3.动物筛选与健康检查

选择健康的青壮年羊驼，确保无基础疾病。免疫用的羊驼最好选择2-3岁的年青成年动物，免疫系统发育成熟。特别要注意避免使用妊娠期的雌性动物用于制备免疫抗体。使用曾经接受过免疫的个体，可获得更干净的抗体背景。

免疫前，还应采血测定动物体内有无滴度交叉反应性天然抗体的存在。为确保动物在整个免疫进程中的健康状态，需要对羊驼来源，饲养环境需进行控制。由于对免疫应答的个别差异，免疫时可选用多只动物进行免疫。

4.免疫注射

采用皮下或肌肉注射方式，每次注射后监测羊驼的健康状态，确保免疫过程安全无副作用。康体生命采用在每次免疫在颈部淋巴结附近左右两侧分两次注射的方式增强免疫效果。

5.血清监测与免疫反应评估

每次免疫后7-10天采血，通过ELISA等方法检测特异性抗体的效价，判断羊驼是否产生足够的免疫应答。如果血清总IgG效价达到10E5，VHH抗体效价达到10E2，则可采血进行文库构建和筛选。如果没有达到，则需要根据数据判断是否需要加强免疫。

6.最终采血和PBMC分离

在免疫结束后，进行大体积采血（通常50-200mL），从血液中分离外周血单个核细胞（PBMC）并保存在TRIzol试剂中，用于后续纳米抗体文库构建和筛选。

康体生命AlpalifeBio

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