100%干货！！康体生命纳米抗体制备-羊驼PBMC提取详细步骤

所需设备

带吊篮式转子的离心机

无菌离心管

移液器

无菌滴管

试剂制备

D-PBS

Ficoll细胞分离液

D-PBS，1% BSA

RNAiso plus

以50ml羊驼血的PBMC提取为例：

1. 将采血管中总体积50ml的血液样品移入2支50ml离心管，并加入50ml D-PBS,缓慢颠倒数次，混合均匀。

2. 将100ml Ficoll细胞分离液加入5支50ml离心管，每支20ml。

3. 将20ml稀释过的血液用滴管小心铺在20ml Ficoll细胞分离液的离心管上。铺样时，注意不要使两种液体混合。

4. 在 18 ºC 至 22 °C下以1100xg 离心20 分钟，并将制动器调制最低档或关闭。

5. 使用无菌滴管吸出含有血浆和血小板的上层，使PBMC层在界面处保持原样。含有血浆的上层可以保存以备后用。

6. 用无菌滴管将PBMC层转移到无菌离心管中。

7. 估计转移的PBMC体积（通常约5ml）。向离心管中的PBMC中加入至少 3 倍体积的含1%BSA的D-PBS，用移液器轻轻捶打，使细胞混匀。

8. 在18 ºC 至 22 °C 下以1100xg 离心20 分钟。

9. 去除上清液后，加入20ml含1%BSA的D-PBS，用移液器轻轻捶打，使细胞混匀。

10. 在18 ºC 至 22 °C 下以1100xg 再次离心20分钟。

11. 去除上清液,用8ml RNAiso plus重新悬浮细胞，并分装保存。