包涵体在原核表达中非常常见，但是没有一个通用的复性解决方案，常用的复性手段有稀释复性、透析复性、分子筛及离子柱层析等，复性遵循原则：低温、低浓度、小梯度，下面我们分享三个蛋白复性的实例。

1. 细菌破碎后离心收集沉淀，trisbuffer洗涤包涵体3-5次，跑胶检测包涵体纯度

2. 用5-10ml 6M盐酸胍（ph1.5）溶解包涵体，室温搅拌30min-1h，离心去除不溶物；

3. 将溶解后包涵体蛋白快速滴定到4℃预冷pbs中，缓慢搅拌，过夜复性，离心去除沉淀；

4. 缓慢加（40%）硫酸铵，3h后离心去沉淀（未完全复性的蛋白）；加终浓度70%硫酸铵，4℃过夜孵育，离心取沉淀，溶解到5-10ml pbs中即为目的蛋白。
   
   

复性结果如下图所示

图1.包涵体检测

泳道1：盐酸胍溶解包涵体  泳道2：包涵体洗涤后

图2.蛋白复性后检测

1.破胞后洗涤沉淀，沉淀用变性剂buffer（8M脲）室温溶解3h后高速离心去除沉淀，上清中加入Ni填料，4℃混匀孵育2h；

2.孵育结束后转移beads至层析柱，依次用不同浓度咪唑Wash buffer冲洗柱子；

3.Elute buffer洗脱蛋白后跑胶检测纯度；

4.包涵体复性：变性蛋白测浓度后滴定入复性buffer（ 100 mM Tris–HCl, 0.5M 甘氨酸, 1 mM氧化型谷胱甘肽,10 mM 还原型谷胱甘肽, pH8.0） ，使蛋白终浓度为0.1mg/ml， 缓慢搅拌，4℃复性反应过夜，离心去除沉淀，上清转移到透析袋，pbs透析4h，换液至少2次，浓缩后过分子筛。

复性结果如下图所示

图3.包涵体纯化结果

泳道1为包涵体溶解后上清，泳道2为包涵体溶解后沉淀，泳道3为20mM洗杂，泳道4为40mM洗杂，
泳道5为60mM洗杂，泳道6为100mM洗杂，泳道7为300mM洗脱，泳道8、9为500mM洗脱

图4.复性后检测结果

柱上复性