想要提高PBMC提取的产量和纯度？羊驼血液PBMC分离的注意事项！
1. 采血后整个细胞分离过程要尽可能快速完成。两个小时内完成实验一般能够达到比较理想的分离效果。所以不建议一次分离太大体积的血液。
2. 分离细胞前首先要稀释血液样品，因为全血中的红细胞会发生聚集，一些PBMC会被包裹进去，与红细胞一起沉淀。通过稀释血液可以降低这种趋势，提高PBMC的回收量。淋巴细胞的产量和纯度在很大程度上取决于红细胞去除效率，所以稀释的步骤非常重要。
3. 蔗糖密度梯度离心的步骤，制动力度要降低甚至关闭，可以减少细胞分层界面的扰动。
4. 离心的温度一般在18-22度之间。温度提高（例如37度），红细胞更容易聚集，并且把PBMC包裹在里面一起沉淀下来。温度降低（例如4度），红细胞聚集速度会降低，但是细胞分离的时间会增加，也会降低淋巴细胞的产量。
5. 离心的时间长短，取决于管内血液样品的高度，样品高度越大，需要的离心时间也就更长。我们常用的实验条件是每支50ml离心管内有10ml血液样品，提前用等体积PBS稀释混匀后，铺在20ml的细胞分离液上，每支离心管的总液体体积是40ml，在 1100 xg 离心20 分钟是比较合适的。离心时间不变的情况下，管中血样的高度如果增加，红细胞不容易充分沉淀，就会造成样品的红细胞污染。
6. 分离完成后要给细胞计数。一定体积的血液分离得到的PBMC数量与羊驼的健康状态有关，健康情况差，体重过低的羊驼免疫后，等体积外周血提取得到的PBMC数量较低。我们的经验是，正常情况下每50ml羊驼血能采集到1x108~2x108个细胞。
