感受态细胞Origami B(DE3)
货号：KTSM114L
规格：{{info.Specification}} ({{info.Specifications}})
储存条件：-80℃
保质期：6个月
运输：干冰运输
【KTSM114L】Origami B(DE3) Chemically Competent Cell说明书.pdf
联系电话
4009963188
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产品说明
Origami B(DE3)菌株包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3区(DE3 区含有T7 噬菌体 RNA 聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，可用于pET 系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。OrigamiB(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率 >10⁸ cfu/μg DNA。
操作方法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞，冰浴5 min, 融化后吸取100 uL，加入目的质粒（连接产物）, 轻轻混匀，冰浴25分钟。
2. 42℃ 水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动。
3. 向离心管中加入700 μL 2YT 或LB无菌培养基（不含抗生素），37℃、200 rpm/min、60分钟培养复苏。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或LB 培养基上。
5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1. 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
6. 具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。
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