感受态细胞BL21(DE3) pLysS
货号：KTSM111L
规格：{{info.Specification}} ({{info.Specifications}})
储存条件：-80℃
保质期：6个月
运输：干冰运输
【KTSM111L】BL21(DE3) pLysS Chemically Competent Cell说明书.pdf
联系电话
4009963188
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产品说明
BL21(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7 溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区(DE3 区含有T7噬菌体 RNA 聚合酶)。BL21(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率 >10⁸ cfu/μg DNA。
操作方法
热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞，冰浴5 min, 融化后吸取100 uL，加入目的质粒（连接产物）, 轻轻混匀，冰浴25分钟。
2. 42℃ 水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动。
3. 向离心管中加入700 μL 2YT 或LB无菌培养基（不含抗生素），37℃、200 rpm/min、60分钟培养复苏。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34μg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的 2YT 或LB 培养基上。
注意事项
1.刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
2.避免反复化冻。
3.避免移液枪吹吸。
4.整个操作过程要轻柔。
5.BL21 (DE3)pLysS菌株携带 pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 ug/ml 氯霉素，以防质粒丢失。
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