TEV蛋白酶
货号：KTSM2005
规格：{{info.Specification}} ({{info.Specifications}})
储存条件：-20℃ 可保存6个月；-80℃ 可保存 12个月
保质期：12个月
运输：冰袋运输
TEV 蛋白酶说明书.pdf
联系电话
4009963188
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产品说明
TEV Protease（烟草蚀纹病毒蛋白酶，Tobacco Etch Virus protease）是一种表达在烟草蚀纹病毒（TobaccoEtch Virus，TEV）中的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七氨基酸序列（Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser），切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸或丝氨酸之间。建议将GST或His等标签设计在融合蛋白的N端，并在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入TEV Protease的酶切位点（上述七氨基酸序列），在GST或His标签被酶切后，目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly或Ser残基，从而最大限度地减少对目的蛋白结构和功能的影响。
TEV Protease（His-tag）产品在大肠杆菌中重组表达，带有His标签（6X His tag），切割后可用镍亲和树脂方便的清除，常用于切除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST) 、His、SUMO等标签。
产品规格
货号： KTSM2005
规格：3.3 kU/支
酶浓度：33 U/μL
体积：100 μL
分子量: 26 kDa
纯度：＞95%（by SDS-PAGE）
酶切条件：TEV Protease的最佳酶切温度是30℃，在29-34℃ 范围内均具有较高的酶活性，但当温度达到或高于37℃ 时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃ 用TEV Protease酶切过夜。TEV Protease在pH6.0-9.0范围内具有活性，而当pH≤5时，会失去酶活性。
抑制剂耐受情况：TEV Protease的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂（serine protease inhibitor）如PMSF 、AEBSF 、bestatin 、pepstatin 、E-64 、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸（Cysteine）残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV Protease的酶活力，因为天然TEV Protease含有其维持酶活所必需的Cys151。
酶活性单位定义：30℃，pH8.0条件下反应1小时，能够切割3 µg对照底物达85%以上所需的酶量为一个活性单位。
储存条件：-20℃ 可保存6个月 -80℃ 可保存 12个月
保存建议：为最大限度的避免损失，我们建议使用前小量分装以避免反复冻融。
储存缓冲液：25 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，5 mM DTT，50%（v/v）甘油， pH8.0
10X TEV 缓冲液： 500 mM Tris-HCl，500 mM NaCl，5 mM EDTA，10 mM DTT，pH 8.0
标签：His (N端)
使用方法说明
由于不同标签蛋白具有不同的特性，所以在实际使用时，建议对酶和标签蛋白的比例进行适当优化，以下是一个简单的估计酶用量的实验方案。
1、每1μL TEV酶可切约100 μg标签蛋白，可按照下表设置酶切反应体系：
组分 | 体积（μL） |
H2O | X |
10X TEV Buffer | 6 |
标签蛋白（100 μg） | Y |
TEV Protease（His-tag）（1U/μL） | ≥1 |
总体积 | 60 |
注：如果标签蛋白浓度为2 μg/μL，那么Y=100/2=50，即须使用50 μL 2 μg/μL的标签蛋白；X=总体积-酶的体积-蛋白的体积-10X TEV Buffer的体积。
2、将反应混合物放置于30℃ 反应1 、2 、4或6小时。如果目的蛋白在30℃ 很不稳定，可以考虑4℃ 反应过夜(16小时左右）。
3、取20 μL样品进行SDS-PAGE电泳分析，确定反应所需的合适酶量和合适的反应时间。
TEV Protease (His-tag)酶活性鉴定结果参考图
TEV切割蛋白的效果图
含有TEV Protease识别位点的66kD 标签蛋白与TEV Protease进行反应，底物的用量为3μg，酶的用量为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1U ，30°C在1X TEV Buffer中反应1h后， 取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约40kD的目的蛋白和约26kD的GFP标签。
声明：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的医疗或诊断程序等。
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